使用淋巴細(xì)胞分離液時(shí)要注意的事項(xiàng)有哪些
更新時(shí)間：2022-04-30 1802
淋巴細(xì)胞分離液是一種根據(jù)細(xì)胞密度差異，借助離心產(chǎn)生的重力加速度，進(jìn)行細(xì)胞的分離純化的常用試劑?？捎糜隗w外分離外周淋巴血細(xì)胞，也可以從其他來(lái)源中分離單核細(xì)胞，包括臍帶血細(xì)胞和骨髓細(xì)胞，適用于從血液及組織勻漿中分離所需細(xì)胞，在醫(yī)療和醫(yī)學(xué)生物中廣泛應(yīng)用。其他人及動(dòng)物多種比重細(xì)胞分離液。
淋巴細(xì)胞分離液的原理：
外周血中單個(gè)核細(xì)胞和單核細(xì)胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同.淋巴細(xì)胞分離液是一種密度介于1.075∽1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細(xì)胞加以分離。
淋巴細(xì)胞分離液使用時(shí)需要注意：
1．在正常大氣壓下，分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為20℃±2℃。分離液在低溫時(shí)呈較高密度，在高溫時(shí)呈較低密度。細(xì)胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，操作前可將樣本和分離液復(fù)溫至18-22℃。為獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在取血后2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液提取后存放時(shí)間越長(zhǎng)細(xì)胞活性越低。
2．實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，如需稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，大大降低細(xì)胞得率及純度。
3．抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素，其他抗凝劑也可使用，但會(huì)影響細(xì)胞活性。應(yīng)注意在血液稀釋過(guò)程中去除抗凝劑體積。
4．實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，不可使用含粉手套、不可使用內(nèi)毒素含量過(guò)高的液體，手套中的粉末顆粒及高內(nèi)毒素會(huì)激活淋巴細(xì)胞從而降低細(xì)胞得率及活性。
5．不可使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，其帶有的靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁影響分離效果。推薦使用未經(jīng)過(guò)堿處理的玻璃離心管。
6．吸取過(guò)多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加。吸取過(guò)多的淋巴細(xì)胞層上層溶液會(huì)導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。
7．如需進(jìn)行B、T細(xì)胞計(jì)數(shù)，則需血液貯藏時(shí)間不得多于10小時(shí)，否則將導(dǎo)致細(xì)胞被激活，得率降低。
8．為去除所混雜的血小板，可在分離液上層加上4-20%蔗糖梯度等滲溶液進(jìn)行二次離心。
